核酸电泳是核酸研究的重要手段之一,其中溴化乙啶(EB)因其低廉的价格是分子生物学中使用最早和最为广泛的核酸电泳染色试剂。但是EB是一种强诱变剂,具有高致癌性,其废弃液必须进行净化处理,而且EB的检测灵敏度有限以及背景信号较高,目前正逐渐被灵敏度高以及安全可靠的新型核酸荧光染料所取代。
Applied BioProbes公司最新推出了一系列核酸荧光染料产品作为EB替代品,具有安全、灵敏度高以及产品性能稳定等优点。GreenView™, GreenView™ Plus, GreenView™ Ultra, and RedView™是Applied BioProbes公司最新研发具有安全无毒,灵敏度高,稳定性好的EB替代品, 使用方法同EB,可用于前染法和后染法,条带整齐不弯曲。
产品特点
- 安全无毒,无致突变
- 稳定性好
- 灵敏度高,条带整齐
图1. GreenView, GreenView Plus, GreenView Ultra, SYBR Safe 和 GelGreen在1%琼脂糖凝胶电泳染色效果。1 Kb DNA Ladder 样品两倍比梯度稀释上样,从左到右各泳道上样量依次为25ng, 50ng, 100ng。
图2. RedView 和 GelRed在1%琼脂糖凝胶电泳染色效果。1 Kb DNA Ladder 样品两倍比梯度稀释上样,从左到右各泳道上样量依次为25ng, 50ng, 100ng。
此外,GreenView™, GreenView™ Plus, and RedView™ 具有较低的细胞膜通透性,不易与细胞内DNA结合,安全性优于SYBR Safe。
图3. SYBR Safe, GreenView, GreenView Plus 和 RedView对细胞的通透性实验。Hela细胞分别与1X SYBR Safe, GreenView, GreenView Plus 和 RedView在37℃孵化30分钟,结果显示SYBR Safe 很容易进入细胞并将细胞核染成亮绿色,而GreenView Plus和RedView则不能穿透细胞膜,表现出比SYBR Safe 更好的安全性。
SafeGreen™和SafeRed™是Applied BioProbes 最新推出的安全灵敏,操作简单的次世代核酸电泳染料,电泳前只需将染料与DNA混合,上样,即可获得条带清晰的染胶效果,整个过程无需前染和后染。
产品特点
- 即用型,操作简单
- 安全无毒
- 灵敏度高
- 成本低
SafeGreen™ 和 SafeRed™ Loading Dye 含 6 × DNA 上样缓冲液中及两类常用的示踪染料 (Xylene Cyanol FF 和 Bromophenol Blue),用以监测电泳期间琼脂糖凝胶条带(呈现紫色和蓝色两个条带)迁移情况。DNA条带可通过 LED 或紫外光直接观察,无需前染和后染步骤。
图 4. SafeGreen™ 和 SafeRed™ 染胶效果。1 kb DNA Ladder (Cat# D001)分别与 SafeGreen™ 和 SafeRed™ 按 5:1 比例混合,然后上样,染胶效果直接在紫外灯下成像。
SafeGreen™ 和 SafeRed™ 无法穿透细胞膜进入活细胞,从而降低了细胞毒性。
图5. SYBR Safe, SafeGreen 和 SafeRed 对细胞的通透性实验。Hela细胞分别与1X SYBR Safe, SafeGreen 和 SafeRed 在37℃孵化30分钟,结果显示SYBR Safe 很容易进入细胞并将细胞核染成亮绿色,而SafeGreen 和SafeRed 则不能穿透细胞膜,表现出比SYBR Safe 更好的安全性。
核酸电泳荧光染料选购指南
GreenView | GreenView Plus | GreenView Ultra | RedView | |
灵敏度 (dsDNA) |
Sensitive (~2 ng) |
Highly sensitive (~0.2 ng) |
Ultra sensitive (~60 pg) |
Sensitive (~1 ng) |
安全性 | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
Gel electrophoresis | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
dsDNA | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
ssDNA | ✔ | ✔ | ||
RNA | ✔ | ✔ | ||
前染法 | ✔ | ✔ | ✔ | |
后染法 | ✔ | |||
胶回收 | ✔ | ✔ | ✔ | |
激发光源 | 蓝光/紫外 | 蓝光/紫外 | 蓝光/紫外 | 紫外 |
滤光片 | SYBR filter | SYBR filter | SYBR filter | EB filter |