免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进行细胞定位。 |
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免疫荧光检测方法根据待检测抗原的丰度采用不同的荧光标记策略。对于高丰度的抗原,可采用荧光标记一抗直接检测的方式;对于中等丰度的抗原,可采用荧光标记二抗的方式对待检测的抗原进行信号放大;对于低等丰度的抗原,可采用生物素标记抗体和荧光标记链霉亲和素的方式对待检测的抗原进行二级信号放大。在整个免疫荧光检测的过程中,荧光染料的性能(信号强度,稳定性,背景信号)对免疫荧光检测的结果发挥着关键性的作用。早期较常用的FITC荧光素标记抗体由于其信号弱,稳定性差,目前正逐渐被新型荧光染料(如Alexa Fluor, Dylight)所取代。 ABP Biosciences 公司最新推出了一系列性能优良的Andy Fluor荧光染料。这些新型荧光染料跟传统的荧光染料(如FITC)相比,具有无可比拟的优越性。公司新推出了一系列Andy Fluor和生物素标记的二抗及相应的标记服务,为广大科研用户提供了广阔的选择。 |
产品特点:
- 荧光信号强;
- 背景信号低,光稳定性好;
- 多色可选择;
- 仪器兼容性好;
荧光标记二抗及链霉亲和素选购指南
二抗 | 链霉亲和素 | ||
Andy Fluor™ 荧光染料 | 其他荧光标记 | 生物素&HRP标记 | Andy Fluor™ & Cy® 荧光染料 |
Andy Fluor™ 350 | Cy 3 | Biotin | Andy Fluor™ 350 |
Andy Fluor™ 405M | Cy 5 | HRP | Andy Fluor™ 488 |
Andy Fluor™ 430 | Cy 5.5 | Andy Fluor™ 555 | |
Andy Fluor™ 488 | Cy 7 | Andy Fluor™ 594 | |
Andy Fluor™ 555 | FITC | Andy Fluor™ 647 | |
Andy Fluor™ 568 | Cy®3 | ||
Andy Fluor™ 594 | Cy®5 | ||
Andy Fluor™ 610 | |||
Andy Fluor™ 647 | |||
Andy Fluor™ 680 | |||
Andy Fluor™ 750 |
Andy Fluor™ 荧光染料耦合物对比其他荧光基团能放出更亮的荧光
图 1. 使用Andy Fluor™ 488、555及647 与 Cy®2、Cy®3及Cy®5制备的羊抗兔IgG抗体的相对荧光亮度对比
图 2. 使用Andy Fluor™ 488、555及647 与 Cy®2、Cy®3及Cy®5制备的羊抗小鼠IgG抗体荧光亮度的流式细胞仪对比。
Andy Fluor™ 荧光染料耦合物对比其他荧光基团成像效果更好。
图 3. Andy Fluor™ 488 羊抗小鼠 IgG (H+L) (L109B) 与 FITC 羊抗小鼠 IgG (H+L) (L146B) 的光漂白率对比较。图中HeLa 细胞的细胞骨架使用小鼠单克隆抗α-微管蛋白抗体结合Andy Fluor™ 488 羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体标记(上行),或使用 小鼠单克隆抗α-微管蛋白抗体结合FITC 羊抗小鼠 IgG (H+L) 抗体标记(下行)。以上三列荧光图像曝光时长各相差60秒(0、60及120秒曝光)。
图 4. 对小鼠肺组织CCSP进行进行免疫荧光染色。小鼠肺FFPE 样品使用兔抗CCSP一抗标记,然后使用Andy Fluor™ 488 羊抗兔IgG抗体(绿色荧光)进行显像。细胞核使用DAPI(蓝)复染。
图 5. 对小鼠肺组织CCSP进行进行免疫荧光染色。小鼠肺FFPE 样品使用兔抗CCSP一抗标记,然后使用Andy Fluor™ 555 羊抗兔IgG抗体(红色荧光,左图)或 Andy Fluor™ 568(红色荧光,右图)进行显像。细胞核使用DAPI(蓝)复染。
图 6. 对BEAS2BNNK细胞α-微管蛋白以及对小鼠肺组织CCSP的免疫荧光染色。经固定和透性化的BEAS2BNNK细胞α-微管蛋白使用抗α-微管蛋白一抗标记,并与生物素羊抗小鼠IgG抗体孵育,然后使用 Andy Fluor™ 488链霉亲和素进行显像(绿色荧光,左图)。小鼠肺FFPE 样品使用兔抗CCSP一抗标记,并与生物素羊抗小鼠IgG抗体孵育,然后使用Andy Fluor™ 488链霉亲和素进行显像(绿色荧光,中图及右图)。细胞核使用DAPI(蓝)复染。
Labeled Secondary Antibodies
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