产品介绍
产品特点
应用
实验操作程序：
应用案例：
本产品包含High-Fidelity DNA Polymerase, dNTP以及优化的反应缓冲液，浓度为2×，扩增能力强，扩增速度快，具有高保真性(保真性是Taq DNA Polymerase的64倍)，高特异性。PCR扩增时，只需加入引物、模板和水，使Master Mix浓度为1× 时即可进行反应。使用本产品可简化操作步骤，节约操作时间，避免因多步操作带来的污染。本品提供的2× High-Fidelity PCR Master Mix含有溴酚蓝，扩增产物可直接电泳。
产品特点
◆ 高保真
◆ 高特异性
◆ 适用于长片段PCR
应用
- 高保真PCR扩增
- 基因定点突变
- 基因克隆
- 长片段扩增或者复杂模板扩增
- 高通量PCR
实验操作程序：
1. 按下列组份配制PCR反应液。
| 成分 | 50 µl反应体系 | 终浓度 |
| H2O | 补至50 µl | |
| 2× FastTaq PCR Master Mix | 25 µl | 1× |
| 10 µM 正向引物 | 1 µl | 200 nM |
| 10 µM 反向引物 | 1 µl | 200 nM |
| 模板DNA | 可变 | as required* |
*50 µl反应体系的DNA模板用量建议如下：
| DNA | 用量 |
| 人基因组DNA | 5 ng – 200 ng ( < 200ng) |
| 大肠杆菌基因组DNA | 100 pg – 100 ng |
| λDNA | 10 pg – 10 ng |
| 质粒或病毒DNA | 10 pg – 10 ng |
2. PCR反应条件设置：
* 扩增片段长度< 10 kb时，延伸时间设为15 – 30 sec/kb;
扩增片段长度> 10 kb时，延伸时间设为30 – 60 sec/kb。
应用案例：
【以λDNA为模板扩增3、8、15、20 kb的DNA片段】
- 按下列组份配制PCR反应液
| 成分 | 50 µl反应体系 | 终浓度 |
| H2O | 22 µl | |
| 2× FastTaq PCR Master Mix | 25 µl | 1× |
| 10 µM 正向引物 | 1 µl | 200 nM |
| 10 µM 反向引物 | 1 µl | 200 nM |
| λDNA (10 ng/ul) | 1 µl | 10 ng |
2. PCR反应条件设置：
* 扩增片段长度3 kb 和 8 kb时，延伸时间设为30 sec/kb;
扩增片段长度15kb 和 20 kb时，延伸时间设为60 sec/kb。
3. PCR扩增结果：
2× High-Fidelity PCR Master Mix 扩增效果
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