本产品包含High-Fidelity DNA Polymerase, dNTP以及优化的反应缓冲液,浓度为2×,扩增能力强,扩增速度快,具有高保真性(保真性是Taq DNA Polymerase的64倍),高特异性。PCR扩增时,只需加入引物、模板和水,使Master Mix浓度为1× 时即可进行反应。使用本产品可简化操作步骤,节约操作时间,避免因多步操作带来的污染。本品提供的2× High-Fidelity PCR Master Mix含有溴酚蓝,扩增产物可直接电泳。
产品特点
◆ 高保真
◆ 高特异性
◆ 适用于长片段PCR
应用
- 高保真PCR扩增
- 基因定点突变
- 基因克隆
- 长片段扩增或者复杂模板扩增
- 高通量PCR
实验操作程序:
1. 按下列组份配制PCR反应液。
成分 | 50 µl反应体系 | 终浓度 |
H2O | 补至50 µl | |
2× FastTaq PCR Master Mix | 25 µl | 1× |
10 µM 正向引物 | 1 µl | 200 nM |
10 µM 反向引物 | 1 µl | 200 nM |
模板DNA | 可变 | as required* |
*50 µl反应体系的DNA模板用量建议如下:
DNA | 用量 |
人基因组DNA | 5 ng – 200 ng ( < 200ng) |
大肠杆菌基因组DNA | 100 pg – 100 ng |
λDNA | 10 pg – 10 ng |
质粒或病毒DNA | 10 pg – 10 ng |
2. PCR反应条件设置:
* 扩增片段长度< 10 kb时,延伸时间设为15 – 30 sec/kb;
扩增片段长度> 10 kb时,延伸时间设为30 – 60 sec/kb。
应用案例:
【以λDNA为模板扩增3、8、15、20 kb的DNA片段】
- 按下列组份配制PCR反应液
成分 | 50 µl反应体系 | 终浓度 |
H2O | 22 µl | |
2× FastTaq PCR Master Mix | 25 µl | 1× |
10 µM 正向引物 | 1 µl | 200 nM |
10 µM 反向引物 | 1 µl | 200 nM |
λDNA (10 ng/ul) | 1 µl | 10 ng |
2. PCR反应条件设置:
* 扩增片段长度3 kb 和 8 kb时,延伸时间设为30 sec/kb;
扩增片段长度15kb 和 20 kb时,延伸时间设为60 sec/kb。
3. PCR扩增结果:
2× High-Fidelity PCR Master Mix 扩增效果