MycoCheck™ Mycoplasma Luminescent Detection Kit

支原体(Mycoplasma)是最小、最简单的原核生物。支原体有如下特征：支原体无细胞壁结构，所以针对细胞壁的许多常见的抗生素，如青霉素或β-内酰胺类抗生素对支原体无效；支原体大小介于细菌和病毒之间，约为0.2-0.8µm，所以部分支原体可通过0.22 µm滤器，常规的过滤对支原体无效；很多支原体由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供营养，所以通常吸附或散落在细胞表面和细胞之间。支原体的这些特征使细胞培养过程中存在支原体污染的风险，细胞的支原体污染已经成为一个世界性的普遍问题。支原体污染可能会严重影响细胞的状态，使细胞的基因表达、代谢特征发生变化，导致细胞生长减缓、分化和死亡异常，严重影响细胞功能。这些影响因素会严重影响实验结果的可靠性、可重复性和一致性，因此支原体污染的检测非常重要。

MycoCheck™发光法支原体检测试剂盒是利用支原体特有酶的活性并通过ATP依赖的萤光素酶催化的发光反应进行检测，通过比较检测试剂加入前后ATP量的变化来确定样品是否有支原体污染。整个检测过程只有两个步骤，仅需约15分钟。第一步是在样品中加入支原体检测试剂A，5分钟后进行检测，读值为A，此时检测的是样品中原有ATP的量；第二步是加入支原体检测试剂B，10分钟后进行检测，读值为B，此时如果样品有支原体污染，其特有的酶可以将支原体检测试剂B中的ADP转换为ATP，此时检测的就是原有的本底ATP量和由支原体特有酶催化新生成的ATP量的总和。通过计算读值B与A的比值就可以判断是否有支原体污染。如果比值大于1.2表示有支原体污染，比值越大说明污染程度越高，如果比值小于0.9说明没有支原体污染，如果比值介于0.9和1.2之间，建议原细胞(包含原培养液)继续培养24-48小时之后再测试一次。

本试剂盒可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染，在细胞培养过程中可随时取少量培养液上清监测是否有支原体污染。

Figure 1. The principle of MycoCheck™ Mycoplasma Luminescent Detection Kit