支原体(Mycoplasma)是最小、最简单的原核生物。支原体有如下特征:支原体无细胞壁结构,所以针对细胞壁的许多常见的抗生素,如青霉素或β-内酰胺类抗生素对支原体无效;支原体大小介于细菌和病毒之间,约为0.2-0.8µm,所以部分支原体可通过0.22 µm滤器,常规的过滤对支原体无效;很多支原体由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供营养,所以通常吸附或散落在细胞表面和细胞之间。支原体的这些特征使细胞培养过程中存在支原体污染的风险,细胞的支原体污染已经成为一个世界性的普遍问题。支原体污染可能会严重影响细胞的状态,使细胞的基因表达、代谢特征发生变化,导致细胞生长减缓、分化和死亡异常,严重影响细胞功能。这些影响因素会严重影响实验结果的可靠性、可重复性和一致性,因此支原体污染的检测非常重要。 MycoCheck™发光法支原体检测试剂盒是利用支原体特有酶的活性并通过ATP依赖的萤光素酶催化的发光反应进行检测,通过比较检测试剂加入前后ATP量的变化来确定样品是否有支原体污染。整个检测过程只有两个步骤,仅需约15分钟。第一步是在样品中加入支原体检测试剂A,5分钟后进行检测,读值为A,此时检测的是样品中原有ATP的量;第二步是加入支原体检测试剂B,10分钟后进行检测,读值为B,此时如果样品有支原体污染,其特有的酶可以将支原体检测试剂B中的ADP转换为ATP,此时检测的就是原有的本底ATP量和由支原体特有酶催化新生成的ATP量的总和。通过计算读值B与A的比值就可以判断是否有支原体污染。如果比值大于1.2表示有支原体污染,比值越大说明污染程度越高,如果比值小于0.9说明没有支原体污染,如果比值介于0.9和1.2之间,建议原细胞(包含原培养液)继续培养24-48小时之后再测试一次。 本试剂盒可快速、有效、高灵敏度地检测支原体污染,在细胞培养过程中可随时取少量培养液上清监测是否有支原体污染。
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Features
- Simple: Only two steps.
- Fast: Get results in as short as 15 min.
- Sensitive: Able to detect numerous mycoplasma species.
Figure 2. The Workflow diagram for the Mycoplasma Detection
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